产品
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR 2019-nCoV 检测试剂盒
预期用途
本试剂盒用于使用咽拭子、鼻咽拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液对新型冠状病毒（2019-nCoV）进行定性检测。本产品检测结果仅供临床参考，不作为唯一依据。为临床诊断和治疗提供依据。建议结合患者的临床表现和其他实验室检查对病情进行综合分析。
检验原理
该试剂盒基于一步 RT-PCR 技术。事实上，选择了2019新型冠状病毒（2019-nCoV）ORF1ab和N基因作为扩增目标区域。设计特异性引物和荧光探针（N基因探针用FAM标记，ORF1ab探针用HEX标记）检测样本中的2019新型冠状病毒RNA。该试剂盒还包括内源内控检测系统（CY5标记的内控基因探针），用于监测样本采集、RNA和PCR扩增的过程，从而减少假阴性结果。
主要成分
| 成分 | 体积（48吨/套） |
| RT-PCR反应液 | 96微升 |
| nCOV引物TaqMan探针混合物（ORF1ab,N基因,RnaseP基因） | 864微升 |
| 阴性对照 | 1500微升 |
| nCOV阳性对照（l ORF1ab N基因） | 1500微升 |
自带试剂：RNA提取或纯化试剂。阴性/阳性对照：阳性对照为含有目的片段的RNA，阴性对照为不含核酸的水。在使用过程中，它们应参与提取，并应被认为具有传染性。应按照有关规定进行处理和处置。
内参基因是人RnaseP基因。
储存条件和有效期
-20±5℃，避免反复冻融5次以上，有效期6个月。
适用仪器
配备FAM/HEX/CY5等多通道荧光PCR仪。
标本要求
1.适用标本类型：咽拭子、鼻咽拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液。
2.标本采集（无菌技术）
咽拭子：用两根拭子同时擦拭扁桃体和咽后壁，然后将拭子头浸入装有采样溶液的试管中
痰液：患者深咳后，将咳出的痰液收集于盛有采样液的螺口试管中；支气管肺泡灌洗液：由医疗专业人员取样。3.样品的储存和运输
用于病毒分离和RNA检测的标本应尽快进行检测。24小时内可检测的标本可4℃保存；24小时内无法检测到的
小时应储存在-70℃或以下（如果没有-70℃储存条件，则应储存在-70℃以下）
暂存于-20℃冰箱）。标本在运输过程中应避免反复冻融。标本采集后应尽快送实验室。如果需要长距离运输样品，建议使用干冰储存。
测试方法
1 样品处理及RNA提取（样品处理区）
建议取200μl液体样品进行RNA提取。相关提取步骤可参考市售RNA提取试剂盒的说明书。正反两面都有
该试剂盒中的对照参与提取。
2 PCR试剂准备（试剂准备区）
2.1 从试剂盒中取出所有组分并在室温下解冻并混合。使用前以 8,000 rpm 离心几秒；计算所需试剂用量，配制反应体系如下表所示：
| 成分 | N 份（25 µl 系统） |
| nCOV 引物 TaqMan 探针混合物 | 18 微升×N |
| RT-PCR反应液 | 2微升×N |
| *N = 测试样本数 + 1（阴性对照）+ 1（nCOV阳性对照） | |
2.2 充分混匀后，短暂离心，使管壁上的液体全部落至管底，然后将20 µl扩增体系分装至PCR管中。
3 取样（标本制备区）
提取后添加5μl阴性和阳性对照。将待测样品的RNA加入PCR反应管中。
盖紧管子并以 8,000 rpm 离心几秒钟，然后将其转移到扩增检测区域。
4 PCR扩增（放大检测区域）
4.1 将反应管放入仪器的样品池中，设置参数如下：
| 阶段 | 循环 数字 | 温度(°C) | 时间 | 收藏地点 |
| 撤销转录 | 1 | 42 | 10分钟 | - |
| 预变性n | 1 | 95 | 1分钟 | - |
| 循环 | 45 | 95 | 15秒 | - |
| 60 | 30秒 | 数据采集 |
仪器检测通道选择：选择荧光信号的FAM、HEX、CY5通道。对于参考荧光 NONE，请不要选择 ROX。
5 结果分析（设置请参考各仪器实验说明）
反应结束后，保存结果。分析完成后，根据图像调整基线的起始值、结束值、阈值（用户可以根据实际情况调整，起始值可设置为3~15，结束值可设置为5~20，调整）在对数图中的阈值窗口，阈值线处于对数期，阴性对照的扩增曲线为直线或低于阈值线）。
6 质控（测试中包含程序性对照） 阴性对照：FAM、HEX、CY5检测通道无明显扩增曲线n
COV阳性对照：FAM和HEX检测通道有明显扩增曲线，Ct值≤32，但CY5通道无扩增曲线；
上述要求必须在同一实验中同时满足；否则，实验无效，需要重新进行。
7 结果测定。
7.1 若检测样本FAM、HEX通道无扩增曲线或Ct值>40，CY5通道有扩增曲线，则可判断不存在2019新型冠状病毒（2019-nCoV）样本中的RNA；
.2 如果检测样本在FAM和HEX通道中出现明显的扩增曲线，且Ct值≤40，则可以判断该样本为2019新型冠状病毒（2019-nCoV）阳性。
7.3 若测试样品仅在FAM或HEX的一个通道有清晰的扩增曲线，且Ct值≤40，而另一通道无扩增曲线，则结果需重新测试。若复检结果一致，则可判定该样本对新产品呈阳性。
2019 年冠状病毒（2019-nCoV）。如果复检结果为阴性，则可判断该样本2019新型冠状病毒（2019-nCoV）呈阴性。
正判断值
采用ROC曲线法确定试剂盒的参考CT值，内参参考值为40。
测试结果的解释
1.每个实验均应检测阴性和阳性对照。只有当控制满足质量控制要求时才能确定测试结果
2.当FAM和HEX检测通道为正时，由于系统竞争，CY5通道（内控通道）的结果可能为负。
3、当内控结果为阴性时，如果试管的FAM和HEX检测通道也为阴性，则说明系统被禁用或操作错误，测试无效。因此，需要对样品进行重新测试。
