产品
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR 检测试剂盒（2019-nCoV）
预期用途
本试剂盒用于对咽拭子、鼻咽拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液等样本进行新型冠状病毒（2019-nCoV）定性检测。本产品检测结果仅供临床参考，不能作为临床诊断和治疗的唯一依据。建议结合患者临床表现及其他实验室检查情况，对病情进行综合分析。
检查原理
该试剂盒基于一步法RT-PCR技术，以2019新型冠状病毒（2019-nCoV）ORF1ab和N基因为扩增靶区，设计特异性引物和荧光探针（N基因探针标记FAM，ORF1ab探针标记HEX），用于检测样本中的2019新型冠状病毒RNA。该试剂盒还包含内源性内参检测系统（内参基因探针标记CY5），用于监测样本采集、RNA和PCR扩增过程，从而减少假阴性结果。
主要组件
| 成分 | 体积（48T/套件） |
| RT-PCR反应液 | 96微升 |
| nCOV引物TaqMan探针混合物（ORF1ab,N基因,RnaseP基因） | 864微升 |
| 阴性对照 | 1500微升 |
| nCOV阳性对照（l ORF1ab N基因） | 1500微升 |
自备试剂：RNA提取或纯化试剂。阴性/阳性对照：阳性对照为含目的片段的RNA，阴性对照为无核酸水。使用过程中，它们应参与提取，并具有传染性，应按照相关规定进行处理和处置。
内参基因为人类RnaseP基因。
储存条件和有效期
-20±5℃，避免反复冻融5次以上，有效期6个月。
适用仪器
可与FAM/HEX/CY5等多通道荧光PCR仪配套使用。
样本要求
1.适用标本类型：咽拭子、鼻咽拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液。
2.标本采集（无菌技术）
咽拭子：用两根拭子同时擦拭扁桃体和咽后壁，然后将拭子头浸入装有采样液的试管中
痰液：患者深咳后，将咳出的痰液收集于装有采样液的螺口试管中；支气管肺泡灌洗液：由医护人员采集。3.样本的储存和运输
病毒分离和RNA检测样本应尽快检测，24小时内可检测的样本可4℃保存；24小时内无法检测的样本，应立即送检。
小时应储存在-70℃或以下（如果没有-70℃的储存条件，则应
样本采集后，请尽快送至实验室。如需长距离运输，建议采用干冰保存。
测试方法
1 样本处理和RNA提取（样本处理区）
建议取200μl液体样品进行RNA提取。相关提取步骤请参考市售RNA提取试剂盒说明书。阴性和阴性
该试剂盒中的对照参与了提取。
2 PCR试剂制备（试剂准备区）
2.1 从试剂盒中取出所有组分，室温解冻混匀。使用前8000 rpm离心几秒钟；计算所需试剂量，反应体系按下表配制：
| 成分 | N份（25µl系统） |
| nCOV 引物 TaqMan 探针混合物 | 18 µl × N |
| RT-PCR反应液 | 2微升×N |
| *N = 检测样本数量 + 1（阴性对照）+ 1（nCOV阳性对照 | |
2.2 充分混匀后，短暂离心，使管壁上的液体全部沉至管底，再将20 µl 扩增体系分装至PCR 管中。
3 取样（试样制备区）
提取后加入阴性、阳性对照各5μl。将待测样本的RNA加入PCR反应管中。
将管盖紧并以 8,000 rpm 的速度离心几秒钟，然后将其转移到扩增检测区域。
4 PCR扩增（扩增检测区）
4.1 将反应管放入仪器的样品池中，设置参数如下：
| 阶段 | 循环 数字 | 温度（摄氏度） | 时间 | 收藏地点 |
| 撤销转录 | 1 | 42 | 10分钟 | - |
| 预变性n | 1 | 95 | 1分钟 | - |
| 循环 | 45 | 95 | 15秒 | - |
| 60 | 30秒 | 数据收集 |
仪器检测通道选择：荧光信号选择FAM、HEX、CY5通道。如需参考荧光NONE，请不要选择ROX。
5 结果分析（设置请参考各仪器的实验说明书）
反应结束后，保存结果。分析后，根据图像调整基线的起始值、终止值、阈值（用户可根据实际情况调整，起始值可设置为3~15，终止值可设置为5~20，调整）在对数图窗口的阈值处，阈值线处于对数期，阴性对照的扩增曲线为直线或在阈值线以下）。
6 质控（检测中包含一个程序性质控） 阴性对照：FAM、HEX、CY5检测通道未见明显扩增曲线
COV阳性对照：FAM、HEX检测通道扩增曲线明显，Ct值≤32，但CY5通道未见扩增曲线；
同一次实验中必须同时满足上述要求，否则实验无效，需要重新进行。
7 结果判定。
7.1 若检测样本在FAM、HEX通道无扩增曲线或Ct值>40，而在CY5通道有扩增曲线，则可判断样本中不含2019新型冠状病毒（2019-nCoV）RNA；
.2 若检测样本在FAM、HEX通道有明显的扩增曲线，且Ct值≤40，则可判断该样本对2019新型冠状病毒（2019-nCoV）呈阳性。
7.3 若检测样本仅在FAM或HEX一个通道出现清晰的扩增曲线，且Ct值≤40，而另一个通道未出现扩增曲线，则需重新检测结果，若重新检测结果一致，则可判定该样本对新试剂盒检测结果为阳性。
2019冠状病毒病（2019-nCoV）。如复检结果为阴性，则可判断该样本对2019新型冠状病毒（2019-nCoV）呈阴性。
阳性判断值
采用ROC曲线法确定该试剂盒的参考CT值与内控参考值均为40。
测试结果的解释
1. 每个实验都应进行阴性对照和阳性对照检测。只有当对照符合质量控制要求时，才能确定测试结果。
2.当FAM、HEX检测通道为阳性时，由于系统竞争，CY5通道（内控通道）的结果可能为阴性。
3.当内控结果为阴性时，如果试管的FAM和HEX检测通道也为阴性，则说明系统故障或操作错误，检测无效，需要重新检测样本。
